將它們分別進(jìn)行一系列稀釋后，在不同的固相載體上按預(yù)定的ELISA檢測(cè)試劑盒操作步驟進(jìn)行測(cè)定，然后比較測(cè)定結(jié)果。在哪一種載體上陽(yáng)性結(jié)果與陰性結(jié)果判別zui大，這種載體就是這一試劑盒測(cè)定的zui合適的固相載體。
ELISA檢測(cè)試劑盒的準(zhǔn)備和保存
A. BDNF 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋和使用：在使用前 2 小時(shí)內(nèi)準(zhǔn)備。
試劑盒提供 2 管標(biāo)準(zhǔn)品，每管 10ng，每次使用 1 管。
1． 配制 10,000pg/ml 標(biāo)準(zhǔn)品：取 1ml 樣品稀釋液加入標(biāo)準(zhǔn)品管內(nèi)，蓋好后靜置 10 分鐘以上，
然后反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解。
2． 配制 2000pg/ml 標(biāo)準(zhǔn)品：取 0.2ml 10,000pg/ml 的標(biāo)準(zhǔn)品加入有 0.8ml 樣品稀釋液的
Eppendorf 管中，混勻，做上標(biāo)記。
3． 配制 1000pg/ml→31.2pg/ml 標(biāo)準(zhǔn)品：準(zhǔn)備 6 只 Eppendorf 管，每管加 0.3ml 樣品稀釋液，
分別標(biāo)記上 1000pg/ml, 500pg/ml，250pg/ml，125pg/ml，62.5pg/ml，31.2pg/ml。取 0.3ml
2000pg/ml 的標(biāo)準(zhǔn)品加入標(biāo)記 1000pg/ml 的管中，混勻后同樣取出 0.3ml , 加入下一只管中。
余同此類推，直到zui后一只樣品管。
注意：已經(jīng)稀釋的標(biāo)準(zhǔn)品（10,000pg/ml），應(yīng)在 12 小時(shí)內(nèi)使用。-20℃冷凍保存條件下，2 天
內(nèi)可以使用,ELISA檢測(cè)試劑盒但不得反復(fù)凍融。
B．生物素標(biāo)記抗人 BDNF 抗體工作液的準(zhǔn)備：在使用前 2 小時(shí)內(nèi)準(zhǔn)備。
1． 根據(jù)每孔需要 0.1ml 計(jì)算總的用量（實(shí)際配制時(shí)應(yīng)多配制 0.1-0.2ml）。
2． 按 1μ ι 生物素標(biāo)記抗人 BDNF 加抗體稀釋液 99μ ι 的比例配制工作液。輕輕混勻。
C．親和素-過氧化物酶復(fù)合物（ABC）工作液的準(zhǔn)備：在使用前 1 小時(shí)內(nèi)準(zhǔn)備。
1． 根據(jù)每孔需要 0.1ml 計(jì)算總的用量（實(shí)配時(shí)應(yīng)多配制 0.1-0.2ml）。
2． 按 1μ ι 親和素-過氧化物酶復(fù)合物（ABC）加 ABC 稀釋液 99μ ι 的比例配制工作液。
輕輕混勻。
ELISA檢測(cè)試劑盒操作程序
已稀釋好的 ABC 和 TMB 顯色液在加入酶標(biāo)板孔前都應(yīng)預(yù)先在 37℃中平衡至少 30 分鐘。試
劑或樣品稀釋時(shí)，切不可忘記混勻。每次檢測(cè)都應(yīng)該做標(biāo)準(zhǔn)曲線。用戶須估計(jì)樣品待測(cè)因子
的含量，決定適當(dāng)?shù)南♂尡稊?shù)。
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